一、全自動多肽合成儀設備校準與準備
 

　　安裝與調(diào)試
 

　　由專業(yè)技術人員進行設備的安裝和調(diào)試，確保設備能夠正確運行。
 

　　檢查溶劑儲液瓶與氣體管道是否連接好，儀器各部分是否完好。
 

　　打開合成儀電源開關及壓縮空氣開關，檢查壓力是否符合范圍(如“AIR”表壓力大于60psi而小于100psi；“N2”表壓力大于5psi而小于10psi)。
 

　　校準與測試
 

　　根據(jù)制造商的說明書進行設備的校準和測試，確保所有系統(tǒng)(如泵、閥、檢測器等)都運行正常。
 

　　進行溫度、條形碼、反應器混合攪拌、取液針、氨基酸推瓶的測試；電磁閥測試；化學試劑瓶和氨基酸瓶的流量校準；UV控制校準。
 

　　選擇合適的反應容器
 

　　根據(jù)合成規(guī)模選擇合適的反應容器，并確保容器的材料不會與反應物或溶劑發(fā)生反應。
 

　　二、試劑與材料準備
 

　　試劑準備
 

　　準備合成用的氨基酸、活化試劑、溶劑等，確保所有材料都是新鮮且純凈的，以避免雜質(zhì)的引入。
 

　　根據(jù)合成方案，按照所需的物質(zhì)比例進行稱量，確保準確性。
 

　　將試劑依次裝入各貼有相應標簽的儲液瓶內(nèi)。
 

　　樹脂準備
 

　　將樹脂加入固相合成儀中，用適當?shù)娜軇?如DCM)溶脹樹脂，然后抽干。
 

　　使用DMF等溶劑洗滌樹脂，以去除雜質(zhì)，洗滌結束后抽干備用。
 

　　三、合成操作
 

　　設置反應條件
 

　　根據(jù)所需多肽的序列和長度設定合適的反應條件，包括溫度、壓力、時間等。
 

　　脫保護
 

　　去除前一個氨基酸的保護基團，使其能夠與下一個氨基酸發(fā)生反應。
 

　　例如，使用40%三氟乙酸/二氯甲烷溶液脫保護，之后用二氯甲烷、甲醇等洗滌。
 

　　偶聯(lián)
 

　　將新的氨基酸與已脫保護的氨基酸結合，形成肽鍵。
 

　　將第一個氨基酸(通常從C端開始)用一定體積的DMF溶解，并加入縮合劑(如DCC、HBTU等)進行活化。
 

　　將活化后的氨基酸溶液投入固相合成儀中，補充DMF至適當反應濃度，攪拌進行縮合反應。
 

　　洗滌
 

　　清洗掉未反應的物質(zhì)和副產(chǎn)物，確保反應的純度。
 

　　每完成一步合成后，都需要通過洗滌來清除反應產(chǎn)生的副產(chǎn)品和未反應的原料，減少雜質(zhì)的積累。
 

　　重復步驟
 

　　重復脫保護和偶聯(lián)步驟，直到多肽鏈達到預定長度。
 

　　四、產(chǎn)物切割與提純
 

　　樹脂裂解
 

　　配置裂解液(通常包含TFA等強酸)，并提前置冰柜中冷藏保存。
 

　　將肽樹脂加入反應釜中，加入預冷的裂解液，攪拌反應以將多肽從樹脂上裂解下來。
 

　　裂解結束后放出反應液，抽濾除去樹脂并以TFA等溶劑洗滌。
 

　　多肽純化
 

　　將裂解液轉入旋轉蒸發(fā)儀中室溫濃縮至小體積。
 

　　使用適當?shù)某恋韯?如甲基叔丁基醚)使多肽析出，并通過離心、洗滌等步驟得到粗肽。
 

　　使用高效液相色譜(HPLC)等方法對粗肽進行純化，以去除雜質(zhì)并分離出目標多肽。
 

　　濃縮、過濾與凍干
 

　　將純化后的多肽溶液旋蒸除去有機溶劑，得到濃縮的多肽溶液。
 

　　對濃縮后的多肽溶液進行無菌過濾。
 

　　將過濾后的多肽溶液置于凍干機中，設定適當?shù)纳郎爻绦蜻M行凍干處理。
 

　　五、質(zhì)量控制與記錄
 

　　監(jiān)控反應進程
 

　　使用適當?shù)臋z測方法(如紫外檢測、質(zhì)譜分析等)監(jiān)控反應進程，確保每一步的反應都按預期進行。
 

　　記錄與報告
 

　　詳細記錄每一步的操作參數(shù)和結果，包括試劑使用量、反應時間、溫度、壓力等。
 

　　生成實驗報告，總結合成過程中的關鍵數(shù)據(jù)和產(chǎn)物純度等信息。